摘要：目的研究瑶药四方藤小复方对类风湿性关节炎（RA）大鼠的抗炎作用，并分析四方藤小复方的作用机制，预测其质量标志物（Q-marker）。方法SD大鼠随机分为对照组、模型组、雷公藤多苷片阳性对照组以及四方藤小复方提取物高、低剂量（28.7、7.2g/kg）组，每组8只。除对照组外，其余各组均采用II型胶原蛋白-完全弗氏佐剂法诱导RA大鼠模型，各给药组在造模期间ig给予相应药物，连续28d。实验期间观察大鼠足趾红肿程度并评分，实验末采用ELISA法测定血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。通过TCMSP和Drugbank数据库搜索并筛选四方藤小复方的化学成分以及预测作用靶点，采用TTD数据库搜索RA疾病靶点。通过String数据库和Cytoscape软件构建和可视化靶点互作网络，通过MCODE插件聚类分析。利用String数据库进行GO和KEGG富集分析。最后结合化学成分的有效性、可测性，预测四方藤小复方的Q-marker。结果与模型组比较，四方藤小复方提取物高、低剂量组及雷公藤多苷片组大鼠足肿胀程度明显减轻（P＜0.01），血清IL-1β和TNF-α水平均显著降低（P＜0.01）。RA的疾病靶点有89个，发病机制与细胞因子-受体作用通路、RA通路异常有关。四方藤小复方中筛选得到31个化学成分、化学成分的作用靶点个，其中12个属于疾病靶点，参与刺激反应调节、细胞增殖调节、细胞代谢过程调节、细胞内信号转导的调控等个生物学过程，以及调控RA通路、TNF通路等条信号通路，最终发挥治疗RA的作用。同时预测得到岩白菜素、白藜芦醇、氯化两面针碱、蛇床子素、芳樟醇、欧前胡素、乙氧基白屈菜红碱、芹菜素、黄连碱、橙皮苷、芝麻素11个成分可作为四方藤小复方的Q-marker。结论四方藤小复方可显著减轻RA大鼠的急性炎症，其可能通过白藜芦醇等多种成分作用于以PTGS2为主的多个靶点，参与调控RA通路、TNF通路等多条炎症免疫通路。岩白菜素、白藜芦醇、氯化两面针碱、蛇床子素、芳樟醇、欧前胡素、乙氧基白屈菜红碱、芹菜素、黄连碱、橙皮苷、芝麻素可作为用于四方藤小复方质量控制的Q-marker。
类风湿性关节炎（RA）是一种常见的以关节滑膜慢性炎症及系统性血管炎为特征的慢性自身免疫功能障碍性疾病[1]，其发病机制复杂，与免疫失调、遗传因素、环境有关[2-4]。四方藤小复方是广西大瑶山区瑶族人民在瑶医药理论指导下治疗风湿痹痛常用瑶药验方中挖掘得到的由瑶药四方藤、买麻藤、两面针和中药独活、千年健组成的小复方。为更好开发瑶医药资源，本课题组对该方进行深入研究，拟开发成具有抗RA作用、质量可控的医疗机构制剂。本课题组前期对该复方中四方藤单味药材进行研究，证实四方藤对RA大鼠具有显著治疗作用，其机制可能与下调滑膜组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核转录因子-κB（NF-κB）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达有关[5]，本研究进一步考察四方藤小复方对RA大鼠的抗炎作用，并借助网络药理学技术分析RA的靶点，揭示RA的发病机制，分析四方藤小复方的主要作用成分、作用靶点和作用通路，揭示四方藤小复方的多成分、多靶点、多通路的作用机制，并预测四方藤小复方的质量标志物（Q-marker），为四方藤小复方质量控制提供参考与依据。
1材料
1.1仪器
EL型电子分析天平（梅特勒公司）；InfinitePRO多功能酶标仪（瑞士TECAN公司）；?80℃超低温冰箱（中国美菱低温科技有限责任公司）；冷冻高速离心机（赛默飞世尔有限公司）。
1.2药品与试剂
雷公藤多苷片（浙江得恩德制药有限公司，批号B）；完全弗氏佐剂（Sigma公司）；白细胞介素-1β（IL-1β）、TNF-α酶联免疫吸附测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；牛II型胶原蛋白（Sigma公司，批号C）；四方藤小复方提取物（广西中医药大学中药制剂共性技术研发重点实验室提供）；四方藤、买麻藤、两面针、独活、千年健药材均购自南宁市万药堂药业有限公司，由广西中医药大学韦松基教授鉴定四方藤为葡萄科植物翼茎白粉藤CissuspterocladaHayata的干燥藤茎、买麻藤为买麻藤科植物买麻藤GnetummontanumMarkgr.的干燥藤茎、两面针为芸香科植物两面针Zanthoxylumnitidum(Roxb.)DC.的干燥根、独活为伞形科植物重齿毛当归AngelicapubescensMaxim.f.biserrataShanetYuan的干燥根，千年健为天南星科植物千年健Homalomenaocculta(Lour.)Schott的干燥根茎。
1.3软件及数据库
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