小血管炎

兔子D二聚体D2DELISAKIT的


来源:ChemicalBook

背景[1-3]

兔子D二聚体(D2D)ELISAKIT可以定量测定兔血清、血浆或其它相关生物液体中D2D含量。

实验原理

用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗D2D抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗D2D抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的D2D呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

兔子D二聚体(D2D)ELISAKIT

兔子D二聚体(D2D)ELISAKIT操作步骤:

1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

2、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

3、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

5、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

6、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

7、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8、测定:以空白空调零,nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

应用[4][5]

用于D-二聚体及Sox2在ANCA相关性血管炎肾受累中的水平及意义研究

D-二聚体是交联纤维蛋白水解后产生的特异性降解产物,是继发性纤溶亢进的标志物,其循环水平升高已广泛用于判断血栓栓塞形成风险的生物学标志物。近年来,D-二聚体在自身性免疫疾病中的作用逐渐成为人们


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